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透射電鏡全套(包埋+制片+拍照)實(shí)驗(yàn)

透射電鏡全套(包埋+制片+拍照)實(shí)驗(yàn)

產(chǎn)品時(shí)間:2024-12-26

簡要描述:

透射電鏡全套(包埋+制片+拍照)實(shí)驗(yàn):透射電鏡(TEM)通過對組織細(xì)胞樣本進(jìn)行樹脂包埋切片,60-80nm厚度的超薄切片,經(jīng)過重金屬鉛、鈾染色后于透射電子顯微鏡中進(jìn)行幾千至幾萬倍的放大成像,從而能夠清楚的觀察到在普通光學(xué)顯微鏡下無法看清的動植物細(xì)胞內(nèi)的超微結(jié)構(gòu),比如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、溶酶體、自噬小體、凋亡小體、葉綠體、液泡、細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌或病毒侵染等結(jié)構(gòu)及病理變化。

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透射電鏡全套(包埋+制片+拍照)實(shí)驗(yàn)

項(xiàng)目介紹

透射電鏡(TEM)通過對組織細(xì)胞樣本進(jìn)行樹脂包埋切片,60-80nm厚度的超薄切片,經(jīng)過重金屬鉛、鈾染色后于透射電子顯微鏡中進(jìn)行幾千至幾萬倍的放大成像,從而能夠清楚的觀察到在普通光學(xué)顯微鏡下無法看清的動植物細(xì)胞內(nèi)的超微結(jié)構(gòu),比如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、溶酶體、自噬小體、凋亡小體、葉綠體、液泡、細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌或病毒侵染等結(jié)構(gòu)及病理變化。透射電鏡超薄切片除了能夠顯示細(xì)胞內(nèi)的超微結(jié)構(gòu)之外,還可用于觀察病原微生物,如各類細(xì)菌真菌等。目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、組織學(xué)、病毒學(xué)、病理學(xué)、分子生物學(xué)、材料科學(xué)等諸多研究領(lǐng)域,是觀察和研究物質(zhì)超微結(jié)構(gòu)的強(qiáng)有力工具。

信帆生物透射電鏡平臺主要設(shè)備包括超薄切片機(jī)Leica EM UC7,透射電鏡HITACHI HT7700 80kv,透射電鏡HITACHI HT 7800 80kv。其中透射電鏡HITACHI HT7700HITACHI HT7800主要技術(shù)指標(biāo)如下:

  分辨率:1.0nm(加速電壓120kV,晶格像)

  放大倍數(shù):200200,000 高反差模式

  4000600,000 高倍模式

  501,000 低倍模式

  加速電壓:40-120KV

 




  實(shí)驗(yàn)流程

  包埋-制片-拍照

 

  送樣運(yùn)輸要求

  送樣時(shí)請下載詳細(xì)填寫附件中的送樣單并與樣品一起送達(dá)信帆生物超微病理實(shí)驗(yàn)室。

  

1 動物組織樣本

① 1-3min內(nèi)取樣,取材前可提前準(zhǔn)備裝有電鏡固定液的培養(yǎng)皿,將小組織塊離體取下后立即投入培養(yǎng)皿內(nèi),用手術(shù)刀在培養(yǎng)皿的固定液中進(jìn)行切割成小塊,取樣組織體積控制在以下尺寸(1mm×1mm×1mm正方體、1mm×1mm×3mm長方體狀、1mm×2mm×3mm薄片狀)。固定液滲透能力有限,超出此范圍后組織會無法完全固定,后續(xù)實(shí)驗(yàn)無法完成,務(wù)必請重視此過程

  

② 取材時(shí)盡量精確到需要觀察的目的部位(如觀察腎小球取腎皮質(zhì);觀察胰島取胰島豐富的胰尾;皮膚,腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進(jìn)行固定)。

③ 取材時(shí)一定注意避免鑷子擠壓等機(jī)械損傷,刀片要鋒利避免挫傷組織。

④ 組織取下后立即投入電鏡固定液內(nèi)室溫避光固定2h,再轉(zhuǎn)移至4℃保存,4℃冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。4°時(shí)樣本可保存1個(gè)月左右

2 植物組織樣本

① 取材要求同動物組織樣本。

② 組織投入固定液后需要進(jìn)行真空抽氣讓組織沉底,如無條件抽氣可用濾紙將組織塞進(jìn)固定液內(nèi),組織不能漂浮在固定液表面。(抽氣做出來的效果會好一些)

3 細(xì)胞樣本

貼壁細(xì)胞:

看細(xì)胞凋亡的,需要把培養(yǎng)液中的細(xì)胞也離心收集后固定

方法一:消化法(實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟簧婕坝^察細(xì)胞膜相關(guān)的內(nèi)容如:觀察緊密連接

培養(yǎng)好的細(xì)胞(細(xì)胞密度不超過70%)棄培養(yǎng)基,加入胰酶消化。

胰酶消化好后(時(shí)間不宜過長),加培養(yǎng)基終止消化,吸管輕輕吹打至細(xì)胞起浮。吸入離心管,低速離心(不超過3000轉(zhuǎn)),3-5min左右,細(xì)胞團(tuán)要有綠豆大小。

棄上清,加入電鏡固定液(固定液需提前恢復(fù)至室溫),細(xì)胞團(tuán)吹散重懸。

室溫避光固定30min,再轉(zhuǎn)移至4℃保存,4°℃冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰

方法二:刮取法

培養(yǎng)好的細(xì)胞(細(xì)胞密度不超過70%)棄培養(yǎng)基,加入電鏡固定液(固定液需提前恢復(fù)至室溫)。

常溫避光固定5min左右,用細(xì)胞刮(或軟橡膠蓋切得平整小方塊)沿一個(gè)方向輕輕刮下細(xì)胞,切記不要反復(fù)刮,避免細(xì)胞刮破。

用巴氏吸管把細(xì)胞液吸入離心管內(nèi),放入離心機(jī)(不超過3000轉(zhuǎn)),低速離心3-5min左右,細(xì)胞團(tuán)要有綠豆大小。

棄固定液后加新的電鏡固定液,細(xì)胞團(tuán)吹散重懸。

室溫避光固定30min,再轉(zhuǎn)移至4℃保存,4℃冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰

懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞要肉眼可見細(xì)胞沉淀有綠豆大小,棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫避光固定30min,再轉(zhuǎn)移至4℃保存,4℃冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰

4 細(xì)菌樣本

長于固體培養(yǎng)基的細(xì)菌:連帶著培養(yǎng)基一起挑下細(xì)菌放于電鏡固定液內(nèi)室溫避光固定30min,再轉(zhuǎn)移至4℃保存, 4℃冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰

懸浮細(xì)菌孢子等:離心收集細(xì)菌要肉眼可見細(xì)菌沉淀綠豆大小,棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫避光固定30min,再轉(zhuǎn)移至4℃保存,4℃冰袋運(yùn)輸,在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰

5 病毒

破碎組織細(xì)胞,粗離心去除細(xì)胞碎片取上清,超速離心分離出病毒(病毒提取的過程需要客戶自己完成)。用緩沖液(如PBS)懸浮病毒,體積至少50ul,遠(yuǎn)距離干冰凍存運(yùn)輸,近距離4℃保存運(yùn)輸,盡快滴片做負(fù)染后及時(shí)電鏡觀察拍照。(噬菌體 4度運(yùn)輸

6 外泌體囊泡等

客戶自己完成外泌體囊泡等的提取收集,用緩沖液(如PBS)或者試劑盒中的保存液懸浮,,體積至少50ul,遠(yuǎn)距離干冰凍存運(yùn)輸,近距離4℃保存運(yùn)輸,盡快制片做負(fù)染后及時(shí)電鏡觀察拍照。(因此類樣品極易降解,樣品越新鮮越好,最好數(shù)小時(shí)內(nèi)完成滴片負(fù)染,否則做出的效果很不理想甚至完全觀察不到)

7 納米材料等無機(jī)材料

直接準(zhǔn)備粉劑,或用純水或無水乙醇懸浮,常溫保存運(yùn)輸即可(需要超聲的備注)。做負(fù)染后電鏡觀察拍照。

 

透射電鏡全套(包埋+制片+拍照)實(shí)驗(yàn)

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